汽車在行駛中發動機故障燈亮后再次啟動，有可能亮，也有可能不亮。這取決于故障的具體情況。若是假故障，比如某次操作超出電腦控制范圍，報出故障代碼但發動機實際工作正常，消除故障碼后再次啟動可能就不會亮；若是存在如氧傳感器故障、發動機內溫度過高等真實故障，再次啟動故障燈大概率仍會亮起。所以需具體情況具體分析，必要時及時檢修。

當車輛自檢完成后，發動機故障燈自動熄滅，說明車輛可能不存在實質性故障。比如在正常駕駛中，車輛偶爾出現的瞬間異常狀況，經過電腦系統的重新評估后恢復正常，這種情況下再次啟動故障燈通常不會亮起。然而，如果發動機故障燈仍然亮著，那就表明車輛極有可能存在真正的故障隱患。

燃油泵不泵油、氧傳感器故障、汽油品質不佳等問題，都可能導致故障燈亮起。節氣門或發動機內部積碳過多，引起混合氣比例失調，發動機控制電腦檢測到控制系統故障，也會使故障燈亮起。當這些問題沒有得到解決時，再次啟動發動機，故障燈必然會持續亮起。

還有一種情況，若發動機故障燈亮起并伴有不太明顯的抖動，熄火3分鐘后再次啟動仍亮，可能是發動機真空軟管破損、老化、有漏氣現象。這就需要車主仔細檢查相關部件，及時處理問題。

汽車在行駛中發動機故障燈亮后再次啟動的情況復雜多樣。車主在遇到發動機故障燈亮起的情況時，務必保持謹慎。倘若故障燈再次亮起，或者車輛出現諸如動力明顯不足、抖動加劇等異常現象，應盡快前往專業的汽車維修店進行全面檢查和維修，避免因小失大，保障行車安全。